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Sommaire

  • 1Nature et rôle d'une enzyme
  • 2Énergie d'activation et état de transition
  • 3Catalyse et équilibre thermodynamique
  • 4Le site actif lock — section verrouillée
  • 5Spécificité enzymatique lock — section verrouillée
  • 6Classification internationale des enzymes lock — section verrouillée
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B2 · Enzymologie

Catalyse enzymatique, site actif et classification des enzymes

Définir une enzyme, son site actif et son mode d'abaissement de l'énergie d'activation, sans modifier l'équilibre thermodynamique. Présenter la spécificité de substrat et de réaction et la classification internationale en six classes.

Biochimie structurale et métabolique·schedule6 min de lecture·quiz15 QCM corrigés

Nature et rôle d'une enzyme

Définition

Enzyme

Catalyseur biologique, le plus souvent protéique, qui accélère une réaction chimique sans être consommé durablement et sans modifier l'état d'équilibre thermodynamique de cette réaction.

Certaines molécules d'ARN possèdent également une activité catalytique, mais la majorité des enzymes étudiées sont des protéines. Leur structure tridimensionnelle organise précisément les groupes chimiques nécessaires à la reconnaissance des réactifs et à leur transformation.

Définition

Substrat

Molécule sur laquelle agit une enzyme et qui est transformée au cours de la réaction enzymatique.

Le substrat est converti en un ou plusieurs produits. L'enzyme participe transitoirement au mécanisme, puis retrouve un état permettant un nouveau cycle catalytique. Elle agit donc en quantité plus faible que les molécules qu'elle peut transformer successivement.

Définition

Catalyse enzymatique

Accélération d'une réaction chimique par une enzyme grâce à la création d'une voie réactionnelle dont l'énergie d'activation est plus faible.

La succession minimale des étapes peut être représentée par la formation réversible d'un complexe entre l'enzyme et son substrat.

Formule

Schéma général d'une réaction enzymatique

E+S⇌ES⇌EP⇌E+P\mathrm{E + S \rightleftharpoons ES \rightleftharpoons EP \rightleftharpoons E + P}E+S⇌ES⇌EP⇌E+P
  • E\mathrm{E}E : enzyme libre
  • S\mathrm{S}S : substrat
  • ES\mathrm{ES}ES : complexe enzyme–substrat
  • EP\mathrm{EP}EP : complexe enzyme–produit
  • P\mathrm{P}P : produit libéré
Méthode

Étapes générales d'un cycle catalytique

  1. Le substrat rencontre l'enzyme et se fixe par des interactions réversibles
  2. La fixation forme le complexe enzyme–substrat et positionne les groupes réactifs
  3. L'enzyme favorise l'accès à l'état de transition
  4. Les liaisons chimiques sont réorganisées et le produit apparaît
  5. Le produit est libéré
  6. L'enzyme régénérée peut engager un nouveau cycle

Énergie d'activation et état de transition

Définition

Énergie d'activation

Barrière énergétique qui sépare les réactifs de l'état de transition et qui doit être franchie pour que la réaction se produise.

Définition

État de transition

Configuration moléculaire transitoire, instable et de haute énergie, située au sommet de la barrière d'activation entre les réactifs et les produits.

À une température donnée, seule une fraction des molécules possède spontanément l'énergie et l'orientation nécessaires pour atteindre cet état. Une barrière élevée rend donc la transformation lente, même si elle est thermodynamiquement favorable.

L'enzyme abaisse l'énergie libre d'activation, notée ΔG‡\Delta G^\ddaggerΔG‡, en proposant un mécanisme réactionnel différent. Elle ne supprime pas la barrière et ne fournit pas nécessairement elle-même l'énergie de la transformation.

Plusieurs contributions peuvent se combiner :

  • rapprochement des groupes réactifs, ce qui augmente leur probabilité d'interaction ;
  • orientation favorable des substrats dans l'espace ;
  • stabilisation préférentielle de l'état de transition par des interactions faibles ;
  • déformation du substrat, qui le rapproche de la géométrie de l'état de transition ;
  • catalyse acido-basique, par transfert transitoire de protons ;
  • catalyse covalente, par formation temporaire d'une liaison entre l'enzyme et le substrat ;
  • création d'un microenvironnement dont les propriétés diffèrent de celles du milieu aqueux environnant.

La somme de nombreuses interactions individuellement faibles fournit une énergie de liaison utilisable pour orienter le substrat et stabiliser l'état de transition.

Catalyse et équilibre thermodynamique

L'énergie libre de réaction ΔrG\Delta_{\mathrm r}GΔr​G compare l'état énergétique des réactifs et celui des produits. Elle détermine le sens thermodynamiquement favorisé, tandis que ΔG‡\Delta G^\ddaggerΔG‡ détermine la rapidité d'accès à l'état de transition. Ces deux grandeurs ne doivent donc pas être confondues.

Formule

Effet énergétique d'une enzyme

ΔGcat‡<ΔGnon cat‡\Delta G^\ddagger_{\mathrm{cat}} < \Delta G^\ddagger_{\mathrm{non\ cat}}ΔGcat‡​<ΔGnon cat‡​ΔrGcat=ΔrGnon cat\Delta_{\mathrm r}G_{\mathrm{cat}} = \Delta_{\mathrm r}G_{\mathrm{non\ cat}}Δr​Gcat​=Δr​Gnon cat​Keq,cat=Keq,non catK_{\mathrm{eq,cat}} = K_{\mathrm{eq,non\ cat}}Keq,cat​=Keq,non cat​
  • ΔGcat‡\Delta G^\ddagger_{\mathrm{cat}}ΔGcat‡​ : énergie libre d'activation de la voie catalysée, en joules par mole
  • ΔGnon cat‡\Delta G^\ddagger_{\mathrm{non\ cat}}ΔGnon cat‡​ : énergie libre d'activation de la voie non catalysée, en joules par mole
  • ΔrGcat\Delta_{\mathrm r}G_{\mathrm{cat}}Δr​Gcat​ : énergie libre de la réaction catalysée, en joules par mole
  • ΔrGnon cat\Delta_{\mathrm r}G_{\mathrm{non\ cat}}Δr​Gnon cat​ : énergie libre de la réaction non catalysée, en joules par mole
  • Keq,catK_{\mathrm{eq,cat}}Keq,cat​ : constante d'équilibre en présence de l'enzyme
  • Keq,non catK_{\mathrm{eq,non\ cat}}Keq,non cat​ : constante d'équilibre en l'absence de l'enzyme

L'enzyme abaisse l'énergie d'activation dans les deux sens. Elle accélère donc simultanément la réaction directe et la réaction inverse. L'équilibre est atteint plus rapidement, mais sa composition finale reste identique.

Attention

Cinétique et thermodynamique

Une réaction rapide n'est pas nécessairement thermodynamiquement favorable. L'enzyme modifie la vitesse en abaissant ΔG‡\Delta G^\ddaggerΔG‡, mais elle ne modifie ni ΔrG\Delta_{\mathrm r}GΔr​G ni la constante d'équilibre KeqK_{\mathrm{eq}}Keq​.

À retenir

Une enzyme ne déplace pas l'équilibre chimique : elle permet seulement de l'atteindre plus rapidement en abaissant l'énergie d'activation.

Le site actif

Définition

Site actif

Région tridimensionnelle de l'enzyme où le substrat est reconnu, fixé et transformé chimiquement.

Le site actif est généralement une cavité ou une fente occupant une petite partie du volume total de l'enzyme. Il est formé par des résidus d'acides aminés qui peuvent être éloignés dans la structure primaire, mais rapprochés par le repliement tridimensionnel de la protéine.

Deux fonctions y sont associées :

  • le site de liaison reconnaît et positionne le substrat grâce à des interactions non covalentes ;
  • le site catalytique contient les groupes chimiques qui participent directement à la transformation.

Ces régions peuvent se chevaucher. Les interactions mobilisées comprennent les liaisons hydrogène, les interactions électrostatiques, hydrophobes et de van der Waals. Leur caractère réversible permet la fixation du substrat puis la libération du produit.

La complémentarité entre le site actif et le substrat n'est pas nécessairement rigide. La fixation peut provoquer un ajustement induit, c'est-à-dire une modification de la conformation de l'enzyme qui améliore le positionnement des groupes catalytiques et la stabilisation de l'état de transition.

Remarque

Certaines enzymes nécessitent un ion métallique ou une molécule organique non protéique associée à leur activité. La nature et le rôle de ces cofacteurs sont traités dans la fiche consacrée aux coenzymes et aux vitamines.

Spécificité enzymatique

Définition

Spécificité enzymatique

Capacité d'une enzyme à reconnaître sélectivement certains substrats et à catalyser un type déterminé de transformation chimique.

La spécificité de substrat résulte de la complémentarité de forme, de charge, de polarité et de disposition spatiale entre le substrat et le site actif. Elle peut être étroite ou plus large selon que l'enzyme accepte une seule structure moléculaire ou un ensemble de molécules apparentées.

La reconnaissance peut également être stéréospécifique : l'organisation asymétrique du site actif permet de distinguer des stéréoisomères. Les notions structurales correspondantes relèvent du sous-bloc consacré à la stéréochimie.

La spécificité de réaction signifie qu'une enzyme catalyse principalement une transformation chimique déterminée. Un même substrat peut donc subir des transformations différentes selon l'enzyme avec laquelle il interagit. Cette propriété vient du positionnement précis des résidus catalytiques dans le site actif.

Comparaison

Deux dimensions de la spécificité enzymatique

CritèreSpécificité de substratSpécificité de réaction
Objet de la sélectionmolécule reconnuetransformation catalysée
Fondement structuralcomplémentarité avec le site de liaisonorganisation des groupes catalytiques
Conséquencecertains substrats seulement sont fixés efficacementun type déterminé de liaisons est formé ou rompu

Classification internationale des enzymes

La classification internationale ordonne les enzymes selon la nature de la réaction catalysée, et non selon leur structure ou le nom de leur substrat. Un numéro précédé des lettres EC identifie l'activité enzymatique ; son premier chiffre désigne la classe principale.

Comparaison

Les six classes principales d'enzymes

ClasseNomRéaction catalysée
EC 1Oxydoréductasestransfert d'électrons ou d'atomes d'hydrogène
EC 2Transférasestransfert d'un groupe chimique entre deux molécules
EC 3Hydrolasesrupture d'une liaison par intervention d'une molécule d'eau
EC 4Lyasesrupture non hydrolytique d'une liaison ou addition sur une liaison multiple
EC 5Isomérasesréarrangement intramoléculaire produisant un isomère
EC 6Ligasesformation d'une liaison entre deux molécules couplée à la consommation d'énergie
À retenir

Critère de classification

La classe EC d'une enzyme dépend exclusivement du type de réaction qu'elle catalyse. Elle ne dépend ni de sa taille, ni de sa localisation, ni de la seule identité de son substrat.

La classification décrit une activité catalytique. Des protéines différentes peuvent donc relever de la même classe si elles catalysent le même type général de réaction. Inversement, des enzymes agissant sur des substrats proches peuvent appartenir à des classes distinctes si les transformations réalisées diffèrent.

Exemple

Classer l'activité de l'hexokinase

L'hexokinase catalyse le transfert d'un groupe phosphate de l'ATP vers le glucose. Les produits sont l'ADP et le glucose-6-phosphate.

Le groupe chimique transféré est donc un groupe phosphate entre deux molécules. Cette activité relève de la classe EC 2, celle des transférases.

La classification dépend ici du transfert de groupe phosphate, et non du fait que le substrat soit le glucose.

Points clés
  • Une enzyme est un catalyseur biologique régénéré après chaque cycle réactionnel
  • Le site actif assure à la fois la reconnaissance du substrat et sa transformation
  • L'enzyme accélère la réaction en abaissant l'énergie libre d'activation ΔG‡\Delta G^\ddaggerΔG‡
  • L'enzyme ne modifie ni l'énergie libre de réaction ΔrG\Delta_{\mathrm r}GΔr​G ni la constante d'équilibre KeqK_{\mathrm{eq}}Keq​
  • La spécificité concerne à la fois le substrat reconnu et la réaction catalysée
  • Les six classes EC sont les oxydoréductases, transférases, hydrolases, lyases, isomérases et ligases

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  • Fiche 02Cinétique michaélienne : Km, Vmax et représentations graphiquesEnzymologie
  • Fiche 03Inhibitions enzymatiques réversibles et irréversiblesEnzymologie
  • Fiche 04Enzymes allostériques et régulation covalenteEnzymologie
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